培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

       產(chǎn)品描述：公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。公司提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項(xiàng)；3、公司售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。

細(xì)胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，進(jìn)口來源，保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

0.094ng/ml人生長激素釋放多肽(GHRP) ELISA試盒pUNO1-mK1-5

0.094ng/ml人促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA試盒pUNO1-mKIT

2.344ng/ml人促狀腺素釋放激素(TRH)ELISA試盒pUNO1-mKLF4b

0.094ng/ml人生長激素釋放因子(GH-RF)ELISA試盒 pUNO1-mKRAS

0.094ng/ml人生長激素結(jié)合蛋白(GHBP)ELISA試盒 pUNO1-mKRT8

0.094ng/ml人顆粒酶B(Gzms-B)ELISA試盒pUNO1-mLAG3

9.375ng/ml人顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試盒pUNO1-mLAMP2a

0.094ng/ml人顆粒溶素(GNLY)ELISA試盒 pUNO1-mLBP

1.875ng/ml人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA試盒pUNO1-mMAP1LC3A

1.875ng/ml人粒細(xì)胞特性抗核抗體(GS-ANA)ELISA試盒 pUNO1-mMAP1LC3B
大鼠胎兒真皮成纖維細(xì)胞歸巢關(guān)聯(lián)細(xì)胞黏附分子(HCAM)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)9-(4-苯基)咔唑(>98.0%(GC))

鈣網(wǎng)蛋白(CRT)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)9-芐基咔唑(>98.0%(GC)(N))

鈣腔蛋白(CALU)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)3--9-苯基咔唑(>98.0%(GC))

成纖維細(xì)胞生長因子19(FGF19)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)咔唑鉀鹽(>90.0%(T))

S100鈣結(jié)合蛋白A8(S100A8)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)咔唑-(>98.0%(GC)(T))

白介素17F(IL17F)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)3,6-二氨基咔唑(>98.0%(T))

ⅩⅢ型膠原(COL13)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)3,6-二-9-苯基咔唑(>98.0%(N))

Ⅶ型膠原(COL7)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)3,6-二-9-基咔唑(>98.0%(GC))

D-多巴色素變位酶(DDT)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)3,6-二咔唑(>98.0%(GC))

彈性蛋白酶3B(ELA3B)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)3,6-二氯咔唑(>96.0%(GC))

泛素關(guān)聯(lián)蛋白2(UBAP2)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)2,7-二咔唑(>98.0%(HPLC)(N))

尿溶蛋白3A(UPK3A)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)3,6-二叔基咔唑(>98.0%(GC))

序列相似家族20成員A(FAM20A)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)3,6-二炔基咔唑(>99.0%(GC))

半胱氨酰白三烯受體1(CYSLTR1)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)3,6-二苯基咔唑(>98.0%(GC))

彈性蛋白酶(ELA)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)9-基咔唑(>97.0%(GC))